细胞传代

细胞密度达到80%~90%时．去培养基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放人细胞培养箱3min。加人1ml DMEM完全培养基终止胰酶消化，转移至15ml离心管。

加入10ml PBS清洗细胞培养盘，转移至15ml离心管，2000rpmX2min，弃上清液。再加入10ml PBS（经高压灭菌，保存于40C），吹匀，吸取10微升进行计数，按照1×106/盘接种，在含5%CO2的细胞培养箱继续培养。

iPS细胞的树立

利用基因修饰技术，将已经失去了全能分化性的小鼠皮肤成纤维细胞改造成具备全能分化性的胚胎干1细胞，这种胚胎干1细胞可以进一步的诱导分化成各种各样的身体细胞，比如心肌细胞、视网1膜细胞等等。而这种细胞就称为iPS细胞（诱导性多功能干1细胞），因为是人工进行培养的细胞，因此又称为人工多功能性干1细胞。现已经可以通过人体皮肤内的体细胞进行培育。

经过了近十多年既漫长又短暂的发展，iPS细胞技术已经取得了举世瞩目的进展。一个个突破性的成果既给我们带来了喜悦，也带来了新的挑战，细胞重编程有望迎来一个新的研究浪潮。尽管iPS细胞有着诱人的应用前景，然而，未来iPS细胞的研究也面临着许多亟需解决的问题：

首先，效率问题。目前，诱导产生iPS细胞的率仍然很低，这与基因导人的方式整合位点、表观遗传学等多种因素有关。这已成为制约iPS从实验室走向临床的zui大瓶颈。因此，如何提高iPS细胞的制备效率仍是人们普遍关注的问题。

第二，安全性问题。现在诱导iPS细胞通常借助逆转录病毒为载体，将几种癌基因转入分化细胞诱导其成为iPS细胞，而这种方法就有可能会因为外源基因插入细胞基因组，干扰了内源基因的表达，从而诱发cancer。

细胞的鉴定

1. u表面标志分子鉴定iPS细胞能够表达多能iPS细胞特异的表面标志分子，如：ssea-1（阶段特异性胚胎抗原1），ssea-3等。这些物质在已分化体细胞表面不表达，从而鉴定。

2. u表观遗传状态鉴定iPS细胞与ES细胞具有相似的DNA甲1基化模式和组蛋白修饰情况。iPS细胞中的多能基因，如oct-4，Nanong等的启动子区域CpG岛从高甲1基化转变为类似ES细胞的低甲1基化状态。

3.u基因表达模式和发育潜能鉴定d. uES和iPS细胞基因表达谱基本相同。iPS细胞具有发育为三个胚层的能力，并能参与生殖系的发育，这与ES细胞相同。iPS细胞的多能基因启动子区域具有与ES细胞相同的高的H3K4Me3及低H3K27Me3水平。