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真核细胞同源重组法

1994 年，Graham F建立了在293细胞同源重组产生重组腺病毒的方法。这个方法需要2个质粒：骨架质粒含有腺病毒绝大部分基因组序列，但不含有包装信号；穿梭质粒含有ITR、包装信号和目的基因克1隆位点，以及两段与骨架质粒有重叠的序列。将目的基因克1隆到穿梭质粒，与骨架质粒共转染293细胞，由于这两个质粒的部分序列有重叠，能够在细胞内发生同源重组，zui终产生完整的载体基因组，并包装出重组病毒颗粒。该方法曾经被广泛使用，推动了腺病毒载体的发展。由于细胞内重组效率低，某些重组事件还可能产生可copy病毒(RCV)，必需经过噬斑纯化才能获得正确的克1隆化的重组病毒，费时费力，正逐渐被其他方法替代。

腺病毒是如何构成的

病毒滴度滴定（组织培养半数感1染量TCID 50）：将分装好的病毒液接种一长满单层Hep-2细胞的96孔板，第yi列每孔加25μl病毒液，作1/lO 稀释，此后依次作倍比稀释，每稀释度接种8孔，zui后一列做阴性对照.对照孔和感1染病毒孔均加入100μl维持液，置37℃ 、5%CO2 培养箱中培养。每天观察并记录出现CPE的孔数及具体时间，待细胞病变不再发展后，观察记录结果，用Reed-Muench法计算病毒滴度TCID 50。

腺病毒感1染后可获得对同型的持久免1疫力

与绝大多数呼吸道感1染的病原相比，机体对腺病毒的再感1染能产生有效的免1疫。起保护作用的是体内产生的循环中和抗1体。正常的健康成人一般也具有多型的抗1体。约40%～60%的6～15岁的人具有1、2和5型中和抗1体，但3、4和7型抗1体很少。母亲的抗1体能保护婴儿免除严重的腺病毒呼吸道感1染。